Paļdis, ka apmeklejot Nature.com.Pōrlūka versejai, kuru lītojat, ir īrūbežōts CSS atbolsts.Lai īgyutu lobōkū pīredzi, īsacejam izmontōt atjaunōtu pōrlūku (voi izslēgt sadereibas režimu Internet Explorer).Pa tū laiku, lai nūdrūšynōtu turpynōtu atbolstu, mes parōdeisim sātys lopu bez stilim un JavaScript.
Insulina nanodalenis (NP) ar augstu slodzeibys saturu ir atrodušys dažaidus pīlītuojumus dažaiduos devu formuos.Itys dorbs ir paradzāts, kab nūvārtātu liofiliziešonys i izsmidzinuošonys procesu ītekmi iz insulina krautu hitozana nanodaleņu strukturu, ar voi bez mannitola kai krioaizsardzeibys leidzekļa. dehidratāceja, hitozana/nātrejis tripolifosfata/insulina škārssaistu nanodaleņu daleņu izmārs tyka optimizāts, lai byutu 318 nm, PDI beja 0,18, īkapsulācejis efektivitate beja 99,4%, i slodze beja 25,01 ar tom,norekonstituceja a%. liofiliziešonys metode bez mannitola izmontuošonys, saglobuoja sovu sferiskū daleņu strukturu.Saleidzynojūt ar mannitolu saturūšom nanodaleņom, kas dehidrātys ar kaidu nu smiļkšu, mannitola bez rasu smiļkšu žāluotom nanodaleņom ari beja mozuokais videjais daleņu izmārs (376 nm) i vysleluokais slodzeibys2% ar2. (98,7%) i PDI (0,20) ar žāluošonys voi līsmuošonys metodem.Žāluotuos nanodalenis ar izsmidzinuošonys žāluošonu bez mannitola ari radeja dreizuokū insulina izdaleišonu i vysleluokū šyunu uzjimšonys efektivitati.Itys dorbs paruoda, ka izsmidzinuošonys žāluošonai var dehidrēt naproparticles ar naproparticles līliešonys metodis, rodūt leluoku kraušonys spieju, zamuokys pīdevu praseibys i darbeibys izmoksys īvārojamu prīškrūku.
Nu tuo atkluošonys 19221,2,3, insulins i tuo farmaceitiskī preparati ir izgluobuši 1. tipa diabetu (T1DM) i 2. tipa diabetu (T1DM) sliminīku dzeiveibys. efekts.Cylvākim, kurim ir diagnosticāts 1. tipa diabets, ir vajadzeigys insulina injekcejis vysu atlykušū dzeivi.Daudzim pacientim, kurim suokūtneji diagnosticāts 2. tipa diabets, ir vajadzeigys ari ilgtermeņa insulina injekcejis.Kasdīnys insulina injekcejis ir nūpītns kasdīnys suopu i diskomforta olūts itim individim, ar nagativu ītekmi iz goreigū veseleibu kai cytu lītuošonu kai rezultatā, insulina īdūšonu, teik plaši pieteiti5, partū ka tim ir potencials atjaunuot apmāram 5 miļjardu cylvāku ar diabetu vysā pasaulī dzeivis kvalitati.
Nanodaleņu tehnologeja ir nūdrūsynuojuse īvārojamu progresu raudzeišonā lītuot peroralū insulinu4,6,7.Taids, kas efektivi īkapsulej i aizsargoj insulinu nu degradacejis mierķtīceigai pīguodei iz konkretom kermiņa vītom. samazynoj ar insulinu apkruotu nanodaleņu biopīejameibu8.Bez tam ir juojam vāra ari nanodaleņu i insulina polimera matricys kimiskuo stabilitate, kab nūdrūšynuotu insulina nanodaleņu (NP) stabilitati.Itūšaļt liofilizāšonys tehnologeja ir zalta standarts stabilu NP radeišonai, vīnlaiceigi nūvieršūt namaineiguos NP.
Tok līsmuošonys žāluošonai vajag pīvīnuot krioprotektantus, kab NP sferiskū strukturu naītekmātu lada kristalu mehaniskais sprīgums.Tys īvārojami samazynoj insulina nanodaleņu slodzeibu piec liofilizacejis, partū ka krioprotektants aizjam leluokū daļu insulina svora attīceibys. nadereigs sausu pulvera sastuovu, par pīmāru, peroralūs tablešu i peroralūs plēvu, ražuošonai, partū ka vajadzeigs lels daudzums sausu nanodaleņu, kab sasnāgtu insulina terapeitiskū lūgu.
Smiļkšu žāluošona ir labi zynoms i lāts ryupnīciskuo mārūga efekts sausūs pulveru ražuošonai nu škidruos fazis farmacejis ryupnīceibā10,11.Kontrole puor daleņu veiduošonuos procesu ļaun pareizi īkapsulēt vairuokus bioaktivūs savīnuojumus 12, 13 it ir . īkapsulāti proteini peroralai lītuošonai.Smiļkšu žāluošonys laikā iudiņs iztvaikoj cīši dreiži, kas paleidz uzturēt daleņu kūdula temperaturu zamu11,14, ļaunūt tuo pīlītuojumam īkapsulēt syltuma jiuteiguos sastuovdalis.Pyrms smiļkšu žāluošonys, puorkluojuma materials ir ryupeigi īkapsulāts ar smiļkšu šķīdumu. sastuovdalis11,14.Atškireibā nu līsmuošonys, homogenizaceja pyrma īkapsuliešonys izsmidzinuošonys žāluošonys laikā uzloboj īkapsuliešonys efektivitati dehidratācejis laikā.Tai kai izsmidzinuošonys īkapsuliešonys procesam nav vajadzeigi krioprotektanti, izsmidzinuošonys žāluošonys var izmontuot, kab radeitu augstu NP saturu ar dri.
Itymā pietejumā ziņuots par insulina pīkrautu NP ražuošonu, izmontojūt hitozana i nātrejis tripolifosfata škārssaistis, izmontojūt jonu gela metodi.Jonu želiešona ir sagataveišonys metode, kas ļaun ražuot nanodalenis, izmontojūt elektrostatiskū sovstarpeigū darbeibu storp divejom voi vairuokom jonu sugom nūteiktūs apstuokļūs. lai dehidratātu optimizātuos hitozana/nātrejis tripolifosfata/insulina škārssaistis nanodalenis.Piec dehidratācejis tūs morfologeja tyka analizāta ar SEM.Tūs rekombinacejis spieja tyka nūvārtāta, mierejūt tūs izmāru sadalejumu, viersa luodeņu, PDI, īkapsulācejis ražuošonys efektivitati ar kvalificātu rezodaleņu, i. dehidratācejis metodis tyka nūvārtātys ari, saleidzynojūt tūs insulina aizsardzeibu, atbreivuošonys uzvedeibu i šyunu uzjimšonys efektivitati.
Jauktuo šķīduma pH i hitozana i insulina attīceiba ir diveji golvonī faktori, kas ītekmej gola NP daleņu izmāru i īkapsuliešonys efektivitati (EE), partū ka tī tīši ītekmej jonotropiskū želiešonys procesu.Jauktuo šķīduma pH tyka paruodeits kai cīši korelejs ar daleņu izmāru i īkapsuliešonys efektivitati A att. 1a, pH pīaugūt nu 4,0 leidz 6,0, videjais daleņu izmārs (nm) sasamazynuoja i EE īvārojami pīauga, bet, kod pH pīauga leidz 6,5, videjais daleņu izmārs suoce pīaugt i EE palyka namaineigs.Tai kai hitozana attīceiba pret insulinu pīaug, videjais daleņu izmārs obthermo pīaug. kod nanodalenis tyka sagataveitys ar hitozana/insulina masys attīceibu, kas ir augstuoka par 2,5:1 (m/m) (1. att. b).Deļtuo optimalī sagataveišonys apstuokli itymā pietejumā (pH 6,0, hitozana/insulina masys attīceiba 2,5:1) tyka izmontuoti, kab sagataveitu itū pietejumu turpluok ar insulinu pīpiļdeitu apstuokļus. insulina nanodaleņu daleņu izmārs tyka optimizāts, lai byutu 318 nm (1. att. c), PDI beja 0,18, īgulšonys efektivitate beja 99,4%, zeta potencials beja 9,8 mv, i insulina slodzeiba beja 25,01% (m/m ). sferisks un diskrets ar saleidzynūši vīnveideigu izmāru (1. att. d).
Insulina nanodaleņu parametru optimizaceja: (a) pH ītekme iz insulina nanodaleņu (sagataveitu hitozana i insulina masys attīceibā 5:1) videjū diametru i īkapsuliešonys efektivitati (EE); (b) hitozans i Insulina masys attīceibys ītekme iz insulina NP (sagataveitu pH 6) videjū diametru i īkapsuliešonys efektivitati (EE); c) optimizātūs insulina nanodaleņu daleņu izmāra sadalejums; (d) optimizātu insulina NP TEM mikrografeja .
Ir labi zynoms, ka hitozans ir vuojs polielektrolits ar pKa 6,5.Tys ir pozitivi uzluodāts skuobajā bareibā, partū ka tuo golvonū aminogrupu protonej iudiņraža joni15.Deļtuo tū bīži izmontoj kai nesēju, kab īkapsulātu nagativi uzluodātys makromolekulys, itymā pietejumā tyka izmontuots insulins. izoelektriskais punkts 5.3.Tai kai hitozans teik izmontuots kai puorkluojuma materials, pīaugūt tuo proporcejai, nanodaleņu uorejuo sluoņa bīzums pīaug attīceigi, rezultatā ir leluoks videjais daleņu izmārs.Bez tuo, augstuoks hitozana leimiņs var īkapsulēt augstu insulina myusu insulina. 2,5:1, i EE nabeja byutisku izmaiņu, kod attīceiba turpynuoja pīaugt.
Bez hitozana i insulina attīceibys pH beja ari izškirūša lūma NP sagataveišonā.Gan et al. 17 pieteja pH ītekmi iz hitozana nanodaleņu daleņu izmāru.Jī atkluoja napuortrauktu daleņu izmāra sasamazynuošonu, cikom pH sasnēdze 6,0, i īvārojamu daleņu izmāra pīaugumu nūvāruoja pi pH > 6,0, kas atbylst myusu nūvāruojumim.Itei paruodeiba ir saisteita ar tū, ka ar molekulu pH pīaugumu lādeņš, taidā veidā, atbolstūt elektrostatisku sovstarpeigū darbeibu ar hitozana/nātrejis tripolifosfata (TPP) kompleksu, rezultatā roduos mozs daleņu izmārs i augsts EE .Tūmār, kod pH tyka pīlāguots leidz 6,5, aminogrupys iz hitozana tyka deprotonātys, rezultatā hitozana bez insulina amino salocīšona i . rezultatā ir zamuoka škārssaitis, leluoks gola videjais daleņu izmārs i zamuoka EE.
Liofilizacejis i izsmidzinuotuos NP morfologiskūs eipašeibu analize var vadeit lobuoku dehidratācejis i pulvera veiduošonuos metodu izlasi.Vālamajai metodei vajadzātu nūdrūšynuot zuoļu stabilitati, vīnveideigu daleņu formu, augstu zuoļu slodzeibu i lobu škeideibu suokūtnejā šķīdumā.Itymā pietejumā, lai lobuok saleidzynuotu ar divejim % NPs1. manitols tyka izmontuots dehidratācejis laikā.Manitols teik izmontuots kai bīzšonys leidzeklis voi krioprotektors dažaiduos sausuo pulvera sastuovdaļuos līsmuošonys žāluošonai i izsmidzinuošonys žāluošonai.Liofilizātajom insulina nanodaleņom bez mannitola, kai paruodeits 2.a attālā, beja cīši poraina pulvera zamskeniešonys i surgu skeniešonys pulvera struktura ar lelu, 100 doc#1281 . (SEM).Pulverī piec dehidratācejis tyka konstatātys mozys atseviškys dalenis (2.e att.).Itī rezultati nūruodeja, ka leluokuo daļa NP tyka sadaleitys līsmuošonys laikā bez kaida krioprotektora.Par liofilizātom i izsmidzinuotom insulina nanodaleņom, kas satur 1% gludū nanoservolu, s. 2b,d,f,h).Insulina nanodalenis, kas izsmidzinuotys bez mannitola, palyka sferiskys, bet iz viersa sagrumbuotys (2.c att.).Sferiskys i sagrumbuotys viersys ir tuoļuok apsprīstys atbreivuošonys uzvedeibys i šyunu uzjimšonys testūs zamuok.Pamatojūtīs iz radzamū dNPried appear bez mannitola i NPs līsmuošonys i izsmidzinuošonys ar mannitu dabuoja smolkus NPs pulverus (2f,g,h att.).Kū leluoka viersa laukums storp daleņu viersmom, tū leluoka škeideigums i leidz ar tū leluoks izdaleišonys ātrums.
Dažaidu dehidrātūs insulina NP morfologeja: (a) SEM attāls nu liofilizātu insulina NP bez mannitola; (b) SEM attāls liofilizātūs insulina NP ar manitolu; (c) smiļkšu žāluoti insulina NP bez mannitola SEM attāls ; (d) SEM attāls nu insulina NP, kas izsmidzynuoti ar manitolu; e) liofilizāta insulina NPs pulvera bez mannitola attāls; f) liofilizātūs insulina NP attāls ar manitolu; ( g) Smiļkšu žāluota insulina NPs pulvera bez mannitola attāls; (h) attēls smiļkšu žāluota insulina NPs pulvera ar manitolu.
Liofilizācejis laikā mannits dorbojās kai krioprotektants, uzturūt NPs amorfā formā i nūvieršūt lada kristalu bojājumus19.Sovukuort smiļkšu žāluošonys laikā nav sasalšonys sūļa.Deļtuo mannits itamā metodē nav vajadzeigs kai preprotektors.Patīseibā smiļkšu žāluots NPs apraksteits.Tūmār mannits vys vēļ var dorbuotīs kai pīpiļdeituojs izsmidzinuošonys žāluošonys procesā, kab NP pīškiertu sferiskuoku strukturu20 (2.d att.), kas paleidz dabuot vīnveideigu itaidu īkapsulātūs NP atbreivuošonys uzvedeibu.Bez tam ir skaidrs, ka dažys lelys dalenis var atkluot both sprin-ray insulin 100 doc#1281 . mannitols (2.b,d att.), kas var byut saisteits ar mannitola uzakruošonu daleņu kūdulā kūpā ar īkapsulātū insulinu. To.Hitozana sluoņs.Ir vārts pīzeimēt, ka itymā pietejumā, lai nūdrūšynuotu, ka sferiskuo struktura palīk naskorts piec dehidratācejis, mannitola i hitozana attīceiba teik turāta 5:1, lai lels pīpiļdeituoja daudzums varātu ari palelynuot žāluotūs NP daleņu izmāru..
Furjē transformacejis infrasorkonuos nūvuojinuotuos kūpejuos atstaruošonys (FTIR-ATR) spektroskopeja raksturuoja breivuo insulina, hitozana, hitozana, TPP i insulina fiziskū maisejumu.Vysus dehidratātūs NP raksturuoja, izmontojūt FTIR-ATR spektroskopeju. NPs līsmuoja ar manitolu i NPs izsmidzinuoja ar mannitolu i bez tuo (3. att.).Kai jau īprīkš ziņuots, itī stypruma pīaugumi beja saisteiti ar škārssaitis storp hitozanu, TPP i insulinu.Hitozana i insulina sovstarpeiguos darbeibys izpiete paruodeja, ka FTIR nadaļu spektrūs ar hitozana slodzeibu ar insulina- insulina, palelynojūt karbonila intensitati (1641 cm-1) i aminu (1543 cm-1) jūstu.TPP tripolifosfatu grupys ir saisteitys ar amonija grupom hitozanā, veidojūt jūslu 1412 cm-1.
Breivuo insulina, hitozana, hitozana/TPP/insulina fiziskūs maisejumu i NP FTIR-ATR spektri, kas dehidratāti ar dažaidom metodem.
Bez tuo, itī rezultati atbylst tim, kas paruodeiti SEM, kas paruodeja, ka īkapsulātī NP palyka naskortys gon izsmidzinuošonys, gon līsmuošonys laikā ar mannitolu, bet mannitola tryukuma gadīnī tikai izsmidzinuošonys žāluošonys radeja leidzeigys īkapsulātys dalenis.Sovukuort FTIR-ATR frees mandrizes very outze pi hitozana, TPP i insulina fiziskajam maisejumam.Itys rezultats nūruoda, ka škārssaitis storp hitozanu, TPP i insulinu vairs nav NP, kas liofilizāti bez mannitola.NPs struktura tyka iznycynuota liofilizācejis laikā bez morfotektanta, kū var redzēt SEM rezultatūs iz FTBa rezultatim (1. att.). dehidratāti insulina NP, tikai liofilizāti, ar smiļkšu žāluoti i bez mannitola NP tyka izmontuoti atjaunuošonys eksperimentim i bez mannitola NP, partū ka mannitola bez NP sadaleišona dehidratācejis laikā. apsprīst.
Dehidratāceju izmontoj ilgtermeņa uzglobuošonai i puorstruodei cytuos sastuovdaļuos.Sausūs NP spieja atjaunuot piec uzglobuošonys ir kritiskys tūs lītuošonai dažaiduos sastuovdaļuos, par pīmāru, tabletēs i plēvēs.Mes pamanejom, ka videjais daleņu izmārs smiļkšu žāluotūs insulina NPn cytu gaismys daleņu atjaunuošonys tryukuma laikā pīauga tikai piec mannitola gaismys rekonstitucejis. smiļkšu žāluotuos i līsmuotuos insulina nanodaleņu ar manitolu īvārojami pīauga (1. tabula).PDI i EE natyka īvārojami maineiti (p > 0,05) piec vysu NP rekombinacejis itymā pietejumā (1. tabula).Itys rezultats nūruoda, ka leluokuo daļa daleņu, kas rezultats redukceja insulina rezultatā, palyka naskortys. liofilizātu i izsmidzinuotu mannitola nanodaleņu kraušona (1. tabula).Sovukuort izsmidzinuotuos NP bez mannitola insulina slodzeibys saturs palyka taids pats kai īprīkš (1. tabula).
Ir labi zynoms, ka nanodaleņu slodze ir kritiskys, kod tuos izmontoj zuoļu pīguodis nūlyukam.NP ar mozu slodzeibu ir vajadzeigs cīši lels materiala daudzums, kab sasnāgtu terapeitisku slīksni.Tūmār tik augstu NP koncentraceju augstuo viskozitate nūvad pi naārteibys voi gryuteibys īdūšonys i gryuteibys2. .Bez tam insulina NP var izmontuot ari tablešu i viskozu biofilmu izgataveišonai23, 24, kas prosa lelu daudzumu NP izmontuošonu zamuos slodzeibys leiminī, rezultatā roduos lelys tabletis i bīzys biofilmys, kas nav pīmāruotys peroralai lītuošonai.Partū dehidrātys NP ar augstu insulina desirableO rezultats. mannitola bez izsmidzinuošonys žāluotī NP var pīduovuot daudzys atraktivys prīškrūceibys itom alternativajom pīguodis metodem.
Vysi dehidratātī NP tyka turāti ledusskapī treis mienešus.SEM rezultati paruodeja, ka vysu dehidratātūs NP morfologeja treis mienešu uzglobuošonys laikā byutiski nasamaineja (4. att.).Piec atjaunuošonys iudinī vysim NP paruodeja nalelu EE sasamazynuošonu i izlaide apm. uzglobuošonys periods (2. tabula).Tūmār vysu nanodaleņu videjais daleņu izmārs pīauga.NP izsmidzinuotu bez mannitola daleņu izmārs pīauga leidz 525 nm, bet izsmidzinuotu i līsmuotu NP ar mannitu pīauga leidz 872 i 921 nm (respektivi2).
100 doc#1281 Dažaidu dehidrātūs insulina NP morfologeja, kas uzglobuota treis mienešus: (a) liofilizātu insulina NP ar manitolu SEM attāls; b) SEM attāls izsmidzinuotu insulina nanodaleņu bez mannitola; (c) bez mannitola SEM attāli par smiļkšu žāluotu insulina NP.
100 doc#1281 Bez tam atšķaidynuotajuos insulina nanodaleņuos tyka radzāti nūgulumi, kas izsmidzinuoja ar manitolu i līsmuoja (S2 att.).Tū var izraiseit lelys dalenis, kas napareizi suspendej iudinī.Vysi augšuok pīmynātī rezultati paruoda, ka insulina izsmidzinuošonys metode var aizsorguot nu augstuos insulina nadaleņu žāluošonys metode . nanodalenis var dabuot bez kaidu pīpiļdeituoju voi krioprotektantu.
Insulina aizturiešona tyka puorbaudeita pH = 2,5 bareibā ar pepsinu, tripsinu i α-himotripsinu, kab paruodeitu NP aizsardzeibys spieju pret enzimatiskū gramuošonu piec dehidratācejis.Dehidratātūs NP insulina aizturiešona tyka saleidzynuota ar svaigi sagataveitu NP, i breivais insulins itys breivais insulins tyka izmontuots kai a. h laikā vysuos trejuos enzimatiskajuos apstruodēs (5.a–c att.).Sovukuort NP, kas līsmuoja ar manitolu, i NP, kas izsmidzynuoti ar mannitolu voi bez tuo, insulina izsliegšonys puorbaude paruodeja īvārojami augstuoku itūs NP aizsardzeibu pret enzimatiskū gramuošonu, kas beja leidzeiga svaigi sagataveituo insulina helpfigure5i). nanodaleņu pepsinā, tripsinā i α-himotripsinā, vairuok nakai 50%, 60% i 75% insulina varēja aizsorguot attīceigi 4 h laikā (5.a–c att.).Itei insulina aizsardzeibys spieja var palelynuot īspieju leluokai insulina uzsyukšonai ar sprotu rezultatu ašņa cirkulacejā i uorpus25. līsmuošona ar manitolu var saglobuot NP insulina aizsardzeibys spieju piec dehidratācejis.
Dehidratātūs insulina NP aizsardzeiba i atbreivuošonys uzvedeiba: a) insulina aizsardzeiba pepsinu šķīdumā; b) insulina aizsardzeiba tripsina šķīdumā; c) insulina aizsardzeiba ar α-himotripsinu šķīdumu; ( d) dehidrātūs NP atbreivuošonys uzvedeiba pH = 2,5 šķīdumā; e) dehidrātūs NP atbreivuošonys uzvedeiba pH = 6,6 šķīdumā; (f) dehidrātūs NP atbreivuošonys uzvedeiba pH = 7,0 šķīdumā.
Svaigi sagataveiti i atjaunuoti sausūs insulina NP inkubēja vysaidūs buferūs (pH = 2,5, 6,6, 7,0) 37 °C, simulejūt muogys, divpadsmitnīka i augšejuos mozuos zornys pH vidi, kab puorbaudeitu insulina ītekmi iz insulina rezistenci. Atbreivuošonys uzvedeiba dažaiduos vidēs.Kuņģa-zarnu trakta fragments.Pi pH = 2,5, ar insulinu pīkrauti NP i rezolubilizātī sausi insulina NP paruodeja suokūtnejū spruodzīņa atbreivuošonu pyrmuos vīnys stuņdis laikā, kam sekuoja lāna atbreivuošona nuokušajuos 5 stuņdēs (his. att. 5d). viersa desorbceja proteina molekulom, kas nav piļneibā imobilizātys dalenis īkšejā strukturā.Pi pH = 6,5, ar insulinu pīpiļdeiti NP i atjaunuoti sausi insulina NP paruodeja gludu i lānu izdaleišonu 6 h laikā, partū ka testa šķīduma pH beja leidzeigs NPs sagataveitajam šķīdumam, pHe7). gondreiž piļneibā sadalynoj pyrmajuos div stuņžu laikā (5.f att.).Tys ir deļtuo, ka hitozana deprotonaceja nūteik augstuokā pH, kuo rezultatā roduos mozuok kompakts polimeru teikls i īkruotuo insulina izadaleišona.
100 doc#1281 Bez tam insulina NP, kas izsmidzynuoti bez mannitola, beja dreizuoks izdaleišonys profils nakai cyti dehidrātī NP (5. att. d–f).Kai jau īprīkš apraksteits, atjaunuotuos insulina NP, kas žāluotys bez mannitola, paruodeja mozuokū daleņu izmāru.Mozuos dalenis byus leluokuo daleņu plateiba. viersā, kuo rezultatā strauja narkotiku izdaleišona26.
NP citotoksicitate tyka pieteita ar MTT testu.Kai paruodeits S4 attālā, tyka konstatāts, ka vysim dehidratātajim NP nav nūzeimeigys ītekmis iz šyunu dzeivuotspieju koncentracejuos 50–500 μg/ml, kas līcynoj, ka vysus dehidratātūs NP var drūsai izmontuot, kab tyktu pi terapeitiskuo lūga.
Aknys ir golvonais organs, caur kuru insulins veic sovys fiziologiskuos funkcejis.HepG2 šyunys ir cylvāka hepatomys šyunu lineja, kū parosti izmontoj kai in vitro hepatocitu uzjimšonys modeli.Ite HepG2 šyunys tyka izmontuotys, kab nūvārtātu NP šyunu uzjimšonu, kas dehidratāti ar konhidrācejis metokalu C. lazera skeniešona, izmontojūt plyusmys citometreju i redzi piec vairuoku stuņžu inkubacejis ar breivu FITC insulinu koncentracejā 25 μg/mL, svaigi sagataveiti FITC ar insulinu pīkrauti NP i dehidrāti FITC ar insulinu pīkrauti NP vīnaiduos insulina koncentracejuos tyka Kvantitativuos mikroskopejis (CLNPyout mannitola) nūvāruojumi. iznycynuoti dehidratācejis laikā i itymā testā natyka nūvārtāti.Svaigi sagataveitu ar insulinu pīkrautu NP, liofilizātu NP ar manitolu, i smiļkšu žāluotu NP ar mannitu i bez tuo (6.a att.) intracelularuos fluoresciešonys intensitatis beja 4,3, 2,6, 2,4 augstuokys par onesulin-4ld. grupā, attīceigi (6.b att.).Itī rezultati līcynoj, ka īkapsulātais insulins ir spieceiguoks šyunu uzjimšonā nakai breivais insulins, golvonūkuort deļtuo, ka pietejumā ražuotuos insulina pīkrautuos nanodaleņu izmārs ir mozuoks.
HepG2 šyunu uzjimšona piec 4 h inkubacejis ar svaigi sagataveitim NP i dehidrātim NP: (a) FITC-insulina uzjimšonys sadalejums HepG2 šyunuos.
Taipat CLSM attāli paruodeja, ka svaigi sagataveitu FITC insulinu pīkrautu NP i FITC insulina pīkrautu izsmidzinuotu žāluotu NP (bez mannitola) FITC fluoresciešonys intensitatis beja daudz stypruokys par puorejūs paraugu šķīduma (6. att. a). rezistence pret šyunu uzjimšonu, kuo rezultatā sasamazynuoja insulina proliferaceja.Itī rezultati līcynoj, ka mannitola bez izsmidzinuošonys žāluotim NP beja vysleluokuo šyunu uzjimšonys efektivitate, partū ka tūs daleņu izmārs beja mozuoks par līsmuošonys NP piec atkuortuotys izškeļšonys.
Hitozans (videjais molekularais svors 100 KDa, 75–85% dezacetilāts) tyka īsaguoduots nu Sigma-Aldrich. ASV).Fluoresceina izotiocianatu (FITC) markiets cylvāka insulins i 4′,6-diamidino-2-fenilindola dihidrohlorids (DAPI) tyka īsaguoduots nu Sigma-Aldriha.
Sagatavoj 1 mg/ml CS šķīdumu, izšķīdynojūt tū dubultūs destilātā iudinī (DD iudinī), kas satur 0,1% etiķskuobis.Sagatavoj 1 mg/ml TPP i insulina šķīdumus, izšķīdynojūt tūs attīceigi DD iudinī i 0,1% etiķskuobē.Prīkšemulseja ar P-CU sagatavōtu1. homogenizators (Brinkmann Ind. Westbury, NY, USA).Sagatavuošonys process ir taids: pyrmkuort, 2ml TPP šķīduma pīvīnoj 4ml insulina šķīdumam, i maisejumu maisej 30min i piļneibā sajauc.Tod, sajauktū šķīdumu pīvīnoj pa pilinim caur šķīdumu augstu CS šķīdumu. (10 000 apgr./min).Maisuojumus turēja uotrā maisšonā (15 000 apgr./min.) lada vannā 30 min, i tūs pīlāguoja nūteiktam pH, lai dabuotu škārssaistis insulina NP.Lai vēļ vaira homogenizātu i samazynuotu insulina NP3 daleņu izmāru. vannā, izmontojūt zondis tipa ultraskanis aparatu (UP 200ST, Hilšera ultraskanis, Teltova, Vuoceja).
Insulina NPS puorbaudeja Z-videjū diametru, polidispersejis indeksu (PDI) i zeta potencialu, izmontojūt dinamiskuos gaismys izkleisšonys (DLS) mierejumus, izmontojūt Litesizer 500 (Anton Paar, Graca, Austreja), atšķaidynojūt tūs DD iudinī 25°C. (TEM) (Hitachi, Tokeja, Japana), i attāli piečuok tyka analizāti, izmontojūt Hitachi attāluošonys programmatūru (Hitachi, Tokeja, Japana).Lai nūvārtātu insulina NP īkapsulācejis efektivitati (EE) i kraušonys spieju (LC), NP tyka pipetēti ultrafiltracejis caurulēs nu stypru k0 k0. 500 xg 30 min.Naīkapsulāts insulins filtratā tyka kvantitativi nūsaceits, izmontojūt Agilent 1100 serejis HPLC sistemu (Agilent, Santaklara, Kaliforneja, ASV), kas sastuov nu kvarternaruo sūkņa, autoparaugu jimšonys, kolonu sildynuotuoja i DAD detektora.Insulins tyka analizāts ar C8xn. 4,6 mm × 150 mm, Agilent, ASV) un atklōts 214 nm.Mobilais fazes beja acetonitrils un yudiņs, kas satur 0,1% TFA, gradienta attīceibas nu 10/90 leidz 100/0, un strōdōja 10 min. tyka īstateits iz 20 °C.Apriekinojit EE i LC procentus, izmontojūt vīnaiduojumus.(1) i Vīnaiduojumus (2).
100 doc#1281 Dažaidys CS/insulina attīceibys nu 2,0 leidz 4,0 tyka puorbaudeitys, lai optimizātu insulina NP.Sagataveišonys laikā pīvīnuoja dažaidus CS šķīduma daudzumus, bet insulina/TPP maisejums tyka turāts namaineigs.Insulina NPs tyka sagataveiti pH diapazonā nu 4,0 leidz 6,5, ryupeigi sajaucūt pH adsulin vysu TPP i CS).Insulina nanodaleņu EE i daleņu izmārs tyka nūvārtāts dažaiduos pH vierteibuos i CS/insulina masys attīceibuos, kab optimizātu insulina NP veiduošonūs.
Optimizātī insulina NP tyka lykti iz alumīnija trauka i apkluoti ar audim, kas pīspīsti ar kaidu lentu.Piec tam skryuveitūs traukus īlyka Labconco FreeZone līsmžāluotuojā (Labconco, Kansas City, MO, USA), kas aprīkots ar paplātis žāluotuoju.Temperatura i vakuums tyka īstateits Tor -50. pyrmuos 2 h, i 0 °C i 0,120 Torr atlykušajuos 22 h nu 24 h, kab dabuotu sausu insulina NP.
100 doc#1281 Lai radeitu īkapsulātu insulinu, tyka izmontuots Buchi mini smiļkšu žāluotuojs B-290 (BÜCHI, Flavil, Šveice).Izvālātī žāluošonys parametri beja: temperatura 100 °C, bareibys plyusma 3 L/min, gazis plyusma 4 L/min.
Insulina NP pyrma i piec dehidratācejis tyka raksturuoti, izmontojūt FTIR-ATR spektroskopeju.Dehidrātuos nanodalenis, kai ari breivais insulins i hitozans tyka analizāti, izmontojūt Spectrum 100 FTIR spektrofotometru (PerkinElmer, Voltems, Masačūsetsa, ASV), kas aprīkots ar universalu ATRP pīkļuotuoju. Masačusetsa, ASV).Signalu videjais tyka īgiuts nu 16 skeniejumim ar 4 cm2 izškiertspieju frekveņču diapazonā nu 4000–600 cm2.
Sausuo insulina NP morfologeju nūviertēja ar līsmuotu i izsmidzinuotu insulina NP SEM attālim, kū uztvēre ar Helios NanoLab 650 fokusātū jonu storu skeniešonys elektronu mikroskopu (FIB-SEM) (FEI, Hilsboro, Oregona, ASV). Golvonais izmontuotais parametrs beja sprīgums 5 keV i strāva 30 mA.
Vysi dehidratātī insulina NP tyka atkuortuoti izškeideiti dd iudinī.Daleņu izmārs, PDI, EE i LC tyka otkon puorbaudeiti, izmontojūt tū pošu īprīkš pīmynātū metodi, kab nūvārtātu tūs kvalitati piec dehidratācejis.Anhidroinsulina NP stabilitati ari tyka miereita, puorbaudūt ituo NP eipašeibys piec prolongy allIndra. uzglobuoja ledusskapī treis mienešus.Piec treis mienešu uzglobuošonys NP tyka puorbaudeiti morfologiskajam daleņu izmāram, PDI, EE i LC.
Izšķīdynoj 5 mL atjaunuotu NP 45 mL, kas satur simulātu kuņģa škidrumu (pH 1,2, satur 1% pepsinu), zornu škidrumu (pH 6,8, satur 1% tripsinu) voi himotripsina šķīdumā (100 g/mL, fosfata evaluata insulina buferā, pH7c. NP piec dehidratācejis.Tūs inkubēja 37°C ar maiseišonys uotrumu 100 apgr./min.500 μL šķīduma savuoce dažaidūs laika punktūs i insulina koncentraceju nūsaceja ar HPLC.
Svaigi sagataveitu i dehidrātūs insulina NP izdaleišonys uzvedeibu in vitro puorbaudeja ar dializis maiseņa metodi (molekularuo svora rūbežs 100 kDa, Spectra Por Inc.).Svaigi sagataveiti i atjaunuoti sausi NP tyka dializāti škidrumā ar pH 2,5, pH01. phophafer 6. suoļs, PBS), lai attīceigi simulātu muogys, divpadsmitnīka i augšejuos mozuos zornys pH vidi.Vysus paraugus inkubēja 37 °C ar napuortrauktu krateišonu ar 200 apgr./min.Aspirej škidrumu uorpus 5 mL dializis maiseņa itaidūs laikūs: 0,1,2,3 ,6 . izreiz papyldynuot tylpumu ar svaigu dializatu.Insulina pīsuorņuojums škidrumā tyka analizāts ar HPLC, i insulina izdaleišonys uotrums nu nanodaleņu tyka apriekinuots nu izdaleituo breivuo insulina attīceibys pret nanodaleņuos īkapsulātū kūpejū insulinu (3. vīnaiduojums).
Cylvāka hepatocelularuos karcinomys šyunu linejis HepG2 šyunys audzeja 60 mm diametra traukūs, izmontojūt Dulbecco modificātū iergļa bareibu (DMEM), kas satur 10% augļa gūvs seruma, 100 SV/ml penicilina, i 100 μg/ml streptominu at39C. 95% relativais mytrums, i 5% CO2.Uzjimšonys testim HepG2 šyunys tyka īsātys ar 1 × 105 šyunu/ml iz 8 bedreišu Nunc Lab-Tek kamerys slīžu sistemys (Thermo Fisher, NY, USA).Citotoksicitatis testim NYC, USA6. bleivums 5 × 104 šyunys/ml.
MTT tests tyka izmontuots, kab nūvārtātu svaigi sagataveitu i dehidratātu insulina NPs30 citotoksicitati.HepG2 šyunys īsāja 96 bedreišu plāksnēs ar bleivumu 5 × 104 šyunu/mL i kultivēja 7 dīnys pyrma puorbaudis.Insulina NPs tyka atšķaidynuotys dažaiduos koncentracejuos da μg/0 m0). kulturys bareibā i tod īdūd šyunom.Piec 24 stuņžu inkubacejis šyunys 3 reizis izmozguoja ar PBS i inkubēja ar bareibu, kas satur 0,5 mg/ml MTT papyldu 4 stuņdis.Citotoksicitati nūviertēja, mierejūt dzaltonuo tezolija enzimatiskū redukceju to MTT7. a Tecan bezgaleigais M200 pro spektrofotometru plāksnis skaiteituojs (Tecan, Menedorfa, Šveice).
100 doc#1281 NP šyunu uzjimšonys efektivitati puorbaudeja ar konfokalu lazera skeniešonys mikroskopeju i plyusmys citometrejis analizi. i inkubēja 4 stuņdis.Šyunys tyka izmozguotys 3 reizis ar PBS i fiksātys ar 4% paraformaldehidu.Kūduli tyka īkruosuoti ar 4′,6-diamidino-2-fenilindolu (DAPI).Insulina lokalizaceja tyka nūvāruota, izmontojūt Olympus FV10wopes mikroskopu skeniešonu, Olympus FV10wopejis lazera konfokotonu/ Piļsāta, Tokeja, Japana).Plūsmys citometrejis analizei 96 bedreišu plāksnem, kas īsātys ar Hepbater hf4 šyunom, pīvīnuoja taidys pošys 10 μg/mL breivuo FITC-insulina, FITC-insulina pīkrautu NP i izškeidynuotu dehidrātūs FITC-insulina NP koncentracejis. inkubacejā, šyunys tyka izjimtys i izmozguotys 3 reizis ar FBS.5 × 104 šyunys iz parauga tyka analizātys ar BD LSR II plyusmys citometru (BD, Franklin Lakes, Ņudžerseja, ASV).
Vysys vierteibys izsaceitys kai videjuos ± standartnūvierzis.Saleidzynuojumi storp vysom grupom tyka nūvārtāti, izmontojūt vīnvierzīņa ANOVA voi t-testu ar IBM SPSS Statistics 26 Mac (IBM, Endicott, Ņujorka, ASV) i p < 0,05 tyka skaiteits par statistiski nūzeimeigu.
Itys pietejums paruoda izsmidzinuošonys žāluošonys elasteibu i spieju dehidrēt škārssaistis hitozana/TPP/insulina nanodalenis ar lobuoku atjaunuošonu, saleidzynojūt ar standarta līsmuošonys metodem, izmontojūt bīzpīna leidzekļus voi krioprotektoru spieju i leluoku slodzeibys spieju optimizātais insulina nanodalenis a3. īkapsulācejis efektivitate 99,4%.SEM i FTIR rezultati piec dehidratācejis paruodeja, ka sferiskuo struktura tyka saglobuota tikai izsmidzinuotuos žāluotuos NP ar mannitolu i bez tuo i liofilizātys ar mannitolu, bet liofilizātī NP bez mannitola tyka sadaleitys testa-dehidratācejis bez insulina. manitols paruodeja mozuokū videjū daleņu izmāru i vysleluokū slodzeibu atjaunuošonys laikā.Vysu itūs dehidrātūs NP atbreivuošonys uzvedeiba paruodeja, ka tī dreiži atbreivojās pH = 2,5 i pH = 7 šķīdumūs, i cīši stabili pH = 6,5 šķīdumūs, saleidzynojūt ar cytim atkuortuoti izšķīdušajim NP dehidratātim dreizuokais atbreivuošona.Itys rezultats atbylst tam, kas nūvāruots šyunu uzjimšonys testā, partū ka ar smiļkšu žāluotim NP mannitola tryukuma gadīnī gondreiž piļneibā uzturēja svaigi sagataveitu NP šyunu uzjimšonys efektivitati.Itī rezultati līcynoj, ka sausuos insulina nanodalenis, kas sagataveitys ar manitolu sagataveitys furtherrays cytuos. bezyudiņa devu formys, par pīmāru, peroraluos tabletis voi biolīmis plēvis.
Intelektualuo eipašuma vaicuojumu deļ ituo pietejuma laikā izveiduotuos i/voi analizātuos datu kūpys nav publiski pīejamys, bet ir pīejamys nu attīceigūs autoru piec pamatuota pīprasejuma.
Kagans, A. 2. tipa diabets: socialuo i zynuotniskuo izceļsme, mediciniskuos komplikacejis i ītekme iz pacientim i cytim.(McFarlene, 2009).
Singhs, AP, Guo, J., Singhs, A., Sje, V. & Džan, P. Insulina īkapsuliešonys atteisteiba: voi niu ir īspiejama perorala lītuošona?J. Farmaceja.biofarmaceja.rezervuars.1, 74–92 (2019).
Vongs, CY, Al-Salami, H. & Dass, CR Jaunuokī sasnāgumi peroralūs ar insulinu pīpiļdeituos liposomu pīguodis sistemuos diabeta uorstiešonai.Interpretaceja.J. Farmaceja.549, 201.–217.